凋亡檢測試劑盒 · 介紹

[產(chǎn)品] Annexin V-FITC/PI 細胞凋亡檢測試劑盒

[貨號] AC12L033

[規(guī)格] 100T

1. 細胞凋亡簡單介紹

細胞凋亡又稱程序性細胞死亡，是一種正常的生理過程，這種細胞死亡方式與細胞壞死不同，他不會引起機體的炎癥反應。細胞凋亡在機體內(nèi)受到高度調(diào)節(jié)，旨在犧牲特定細胞為生物體謀取更多益處，細胞凋亡廣泛存在于生長發(fā)育和衰老的各個環(huán)節(jié)中，有時也作為一種防御機制。

細胞凋亡過程中，細胞具有典型的形態(tài)學特征：第1階段中（持續(xù)時間很短）細胞的間接觸消失，但胞膜尚完整，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的核糖體脫落，細胞核出現(xiàn)固縮；第2階段中細胞核碎裂后與細胞內(nèi)的各種細胞器結(jié)合，并進一步被質(zhì)膜包裹形成凋亡小體；第3階段中吞噬細胞吞噬凋亡小體，將其消化并重新供機體使用。

2. 細胞凋亡信號通路

細胞凋亡的途徑主要有兩種且相互關(guān)聯(lián)，外源性或死亡受體途徑、內(nèi)在性或線粒體途徑。外源性途徑涉及跨膜受體介導的相互作用，當細胞表面的死亡受體（FAS受體）被激活，啟動半胱天冬酶（Caspase）級聯(lián)反應，該反應能導致細胞死亡；而內(nèi)在途徑直接在細胞內(nèi)啟動，由線粒體釋放促凋亡蛋白（SMAC和細胞色素C），從而激活半胱天冬酶，導致細胞凋亡。

3. 細胞凋亡如何檢測（基于生物學功能、生化標記方法）

（1）Annexin V-FITC/PI檢測法

磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine，PS）為帶負電荷的磷脂，位于正常活細胞細胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，細胞凋亡早期 PS 發(fā)生外翻，暴露于細胞膜外側(cè)。Annexin V(AV)是一種分子量約為36 kDa 的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，與PS有高度親和力，因此利用FITC標記的AV蛋白可以結(jié)合細胞膜外側(cè)的PS，用于指示早期凋亡細胞。

碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）是一種核酸染料，PI 無法通過正常的細胞膜或早期凋亡的細胞膜, 但可以透過凋亡中晚期細胞或者壞死細胞的細胞膜并對細胞核進行染色，用以區(qū)分存活的早期凋亡細胞、晚期凋亡細胞以及壞死細胞。

因此FITC-Annexin V 與PI 雙染方法可以將處于不同凋亡時期的細胞區(qū)分開。

（2）JC-1 線粒體膜電位檢測

線粒體膜電位降低是細胞早期凋亡的一個標志，當線粒體膜通透性發(fā)生改變時，膜電位會降低。JC-1 是一種廣泛用于檢測線粒體膜電位△ Ψm 的理想熒光探針，在線粒體膜電位較高時，產(chǎn)生紅色熒光；在線粒體膜電位較低時，產(chǎn)生綠色熒光。

（3）TUNEL檢測法

細胞凋亡的一個顯著特點是細胞染色體 DNA 的降解，這種降解非常特異并有規(guī)律，所產(chǎn)生的不同長度的 DNA 片段約為 180 bp-200 bp 的整數(shù)倍，表現(xiàn)為瓊脂糖凝膠電泳中呈現(xiàn)特異的梯狀 Ladder 圖譜。

TUNEL 法可以選擇性的對凋亡細胞直接進行原位檢測， 而非壞死細胞或因輻照和藥物治療而造成的 DNA 鏈斷裂的細胞，是一種更快速、直接的檢測手段。

（4）凋亡相關(guān)分子檢測法

在半胱天冬酶家族中，Caspase-1、3、7和8主要參與細胞凋亡過程。測量活細胞中的 Caspase 1 活化能夠檢測細胞凋亡。Caspase-3 具有特異性的底物多肽識別序列，通過 Caspase 3 作用，斷裂 Rh 110 多肽，產(chǎn)生具有強烈綠色熒光的 Rh 110。Caspase-8由CASP8基因所編碼，已被證明具有底物選擇性，通過 Caspas-8 的切割 R110 肽產(chǎn)生強綠色熒光。

（5）DNA染色檢測法

Hoechst 33258 和Hoechst 33342是一種低細胞毒性的穿透細胞膜的藍色熒光染料。Hoechst 33258 為特異性 DNA 染料，與 A-T 鍵結(jié)合，這種染料對死細胞或經(jīng)70%冷乙醇固定的細胞可立即染色，而活細胞的著色是漸進性的，在 10 min 內(nèi)可達飽和。在熒光顯微鏡下，活細胞核呈彌散均勻熒光，出現(xiàn)細胞凋亡時，細胞核或細胞質(zhì)內(nèi)可見濃染致密的顆粒塊狀熒光。

超級雙十二 · 活動

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1.關(guān)注微信公眾號后回復“凋亡檢測"參與活動；

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超級雙十二 · 活動規(guī)則

活動時間：即日起-2024年1月12日

活動范圍：全國生物相關(guān)終端客戶

試用裝領取方式：請聯(lián)系各區(qū)域代理商、業(yè)務員，確認后會盡快送達。

注意事項：

1.關(guān)注微信公眾號后參與活動；

2.活動最終解釋權(quán)歸和元李記所有。