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線粒體染色試劑盒的知識點有必要和大家說說

更新時間:2018-12-22      點擊次數(shù):1525
    線粒體染色試劑盒的固定和透化,染色結(jié)束后,利用培養(yǎng)液或緩沖液清洗細胞。小心吸走清洗液,換用新鮮配制且預(yù)熱的含2-4%甲醛的緩沖液或培養(yǎng)液進行細胞固定。清洗細胞:吸除固定液,用適當(dāng)緩沖液沖洗細胞數(shù)次。細胞透化(可選)可將已固定的細胞直接加入含有去污劑如Triton X-100的緩沖液中孵育。透化結(jié)束后,用緩沖液清洗細胞即可進行后續(xù)ICC實驗。一般用含0.2% Triton X-100的PBS孵育細胞10分鐘可以達到良好的透化效果。還可利用預(yù)冷的丙酮透化5 分鐘,之后用PBS清洗細胞。經(jīng)驗證,即使后繼沒有進一步的抗體標(biāo)記,丙酮透化處理也可降低背景信號。
    細胞染色,對于貼壁細胞,培養(yǎng)皿/培養(yǎng)板準(zhǔn)備細胞樣本。待細胞生長到合適豐度,吸除培養(yǎng)液,加入適量37℃預(yù)熱的含探針工作液。于生長狀態(tài)下孵育15分鐘~45分鐘(具體孵育時間需根據(jù)細胞類型而定,需預(yù)實驗優(yōu)化)也可以將細胞置于培養(yǎng)皿中的蓋玻片上,加入合適培養(yǎng)基,使其爬片生長,利用新鮮培養(yǎng)基替換上述染色液。若染色不夠充分,建議增加染料濃度或延長染色時間。熒光顯微鏡(含合適濾片)或流式細胞儀、熒光酶標(biāo)儀下觀察。zui大激發(fā)/發(fā)射波長為579 / 599nm?;蛘哌M行后續(xù)的固定和透化步驟,對于懸浮細胞,離心,吸除上清。利用37℃預(yù)熱的探針工作液重懸細胞,于生長狀態(tài)下孵育30分鐘~2小時(具體時間需根據(jù)細胞類型而定,需預(yù)實驗優(yōu)化)離心,吸除染色液,加入新鮮培養(yǎng)液重懸細胞。置于熒光鏡下觀察。或流式細胞儀、熒光酶標(biāo)儀檢測。zui大激發(fā)/發(fā)射波長為579 / 599nm。或者進行后續(xù)的固定和透化步驟。
    線粒體染色試劑盒是一種雙膜結(jié)合的細胞器,存在于大多數(shù)真核細胞中。線粒體的功能是提供細胞能量。此外,線粒體參與其他任務(wù),如信號傳遞、細胞分化和細胞死亡,以及維持對細胞周期和細胞生長的控制。線粒體與多種人類疾病有牽連,包括線粒體疾病、心臟疾病、心力衰竭和孤獨癥。線粒體可能在這些細胞過程中發(fā)揮重要作用。
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